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Análisis de beta-glucosidasa en sangre seca recolectada en papel filtro (DBS), reporte de un nuevo método aplicado a población control y pacientes con sospecha de enfermedad de Gaucher
(2021) Ana Camila Vásquez-Salazar; Alfredo Uribe
La enfermedad de Gaucher (GD) es el trastorno de almacenamiento lisosomal que se caracteriza por la deficiencia en la actividad enzimática de la β-glucosidasa (BGLU), lo que produce la acumulación de glucosilceramida en las células. Su diagnóstico se orienta a la valoración de la enzima en los leucocitos afectados. Se han realizado estudios en DBS para la actividad de BGLU en el seguimiento de poblaciones de alto riesgo; sin embargo, presentan interferencias relacionadas a leucopenias severas o expresión aumentada de la isoforma neutra de la enzima BGLU, molécula no relacionada con GD. El objetivo de este estudio fue la estandarización de un método de tamizaje en DBS (punch: 5 mm) con el uso de 4-metilumbeliferil-β-D-glucósido y conduritol-β-epóxido. Se analizaron muestras de dbs de 395 individuos con sospecha clínica (población de alto riesgo o AR), 151 controles y 16 pacientes afectados, usando la elución de un corte de 5 mm (≈10 μl de sangre) en 300 μl de Tritón X-100/(0,5 %). Como resultados, se obtuvieron los rangos, AR: 0,84-26,92 nmol/ml/h, controles: 3,56- 8,92 nmol/ml/h (M = 5,56, ds = 1,15) y pacientes confirmados con GD: 0,82- 2,88 nmol/ml/h (M = 1,64, ds = 0,57). El punto de corte entre deficientes y controles fue 3,22 nmol/ml/h, obtenido a partir de análisis ROC (99 % confianza, 100 % sensibilidad y 100 % especificidad). El protocolo permitió evidenciar la deficiencia en todos los casos de GD, confirmados mediante el análisis en paralelo de la enzima en aislamiento leucocitario. Se recomienda el uso del CBE y realizar la elución del corte a 5 mm, a fin de llevar a cabo la valoración enzimática con un volumen mayor aproximado de sangre y en ausencia de la actividad generada por la isoforma neutra.
Análisis de la β-Galactosilceramidasa leucocitaria en pacientes Colombianos con sospecha clínica de enfermedad de Krabbe, un tamizaje de alto riesgo.
(2017) Lina Manuela Jay Garcia; Alfredo Uribe; Adis Ayala Fajardo
La Enfermedad de Krabbe (EK), es un desorden del metabolismo de esfingolípidos de herencia autosómica recesiva causada por la deficiencia de β- galactosilceramidasa (β-Galsil) (E.C. 3.2.1.46), defecto enzimático que causa un cuadro neurodegenerativo, hipertonía muscular y espasticidad, convulsiones, pérdida de la audición y en un 85% de los casos la muerte temprana, entre otros hallazgos.La incidencia de la EK documentada para Estados Unidos y Europa es de 1:100.000 recién nacidos, pero estudios recientes han demostrado valores mayores de 1:22.000 aproximadamente en New York. En América Latina los informes son escasos, con reportes de tamizaje de alto riesgo en Brasil y casos aislados en México, ofreciendo un panorama de subdiagnóstico importante, situación a la que no es ajena Colombia, donde no hay en la literatura referentes a la enfermedad.Se presenta entonces a la comunidad científica, un estudio de valores de actividad y de referencia para la enzima β-Galactosilceramidasa leucocitaria, a partir de 259 muestras de 110 individuos sanos y 149 pacientes con compromiso neurodegenerativo (CND). La valoración enzimática involucró dos métodos (Colorimétrico y Fluorométrico) de punto final que permitieron establecer un rango de referencia para β-Galsil en técnica Colorimétrica: 2,04 -14,93 nmol/mgprot/h y en técnica fluorométrica: 0,3 – 4,21 nmol/mgprot/h. El estudio de tamizaje permitió identificar un paciente afectado con enfermedad de Krabbe quien presentó valores de actividad expresados en nmol/mgprot/h de 1,85 y 0,034, en forma correspondiente para las técnicas antes descritas. Un hallazgo final que permite validar los dos métodos estandarizados para el diagnóstico de la enfermedad y establecer valores de referencia en población colombiana.
Análisis de quitotriosidasa en población control e individuos con desordenes lisosomales: estudio en gotas de sangre seca recolectada en papel filtro
(2010) Alfredo Uribe
Introducción: la Quitotriosidasa (QT) representa una glicosil hidrolasa secretada por los macrófagos cuya deficiencia no ha sido reportada como causal de condición patológica. Sin embargo, su sobreexpresión si puede estar relacionada con alteraciones que afectan el metabolismo lisosomal, sin ser una condición exclusiva. Se ha evidenciado ampliamente la enfermedad de Gaucher como la entidad donde la Quitotriosidasa muestra su mayor incremento. Sin embargo, este fenómeno también puede darse en forma moderada a leve en desordenes como Gangliosidosis, Niemann Pick, Krabbe y algunas mucopolisacaridosis. Por lo tanto, estudiar el comportamiento de la enzima en población de referencia e individuos afectados con desordenes lisosomales (LD) es prioritario para poder establecer adecuadamente los lineamientos de la terapia de reemplazo enzimático bajo el monitoreo de dicho biomarcador. Materiales/Métodos: cuantificación de valores de actividad de Quitotriosidasa en sangre seca recolectada en papel filtro: 493 muestras control y 139 pacientes afectados por diferentes enfermedades de depósito (Gaucher n=107, Fabry n=2, Gangliosidosis n=2, Mucopolisacaridosis n=8, Niemann Pick n=1 y otros desordenes no clasificados n=19), edades entre 2días-60años. Obtención de resultados por método fluorométrico de punto final. Resultados/Co nclusiones: estimaciones enzimáticas en población normal mostraron un rango de 0,0-94- nmol/ml/hora, 90% son valores 181nmol/ml/hora), otras enfermedades de depósito 70-374nmol/ml/ hora. Un hallazgo interesante es que algunos posibles portadores de enfermedades de depósito o pacientes infectados crónicamente pueden mostrar leves incrementos o valores en el límite superior de actividad enzimática.
Deficiencia de glucosa 6-fosfato deshidrogenasa en Colombia: memorias de 22 años de tamizaje de alto riesgo
(2017) Alfredo Uribe
La deficiencia de la Glucosa 6 Fosfato Deshidrogenasa es un desorden hereditario del metabolismo ligado al cromosoma X, considerada como la enfermedad metabólica de mayor frecuencia a nivel mundial con más de 400 millones de individuos afectados, es la causa más común de anemia hemolítica no autoinmune de origen metabólico. La prevalencia calculada para Colombia según la organización mundial de la salud se encuentra entre 3 – 7%, pero los reportes de estudios poblacionales son escasos, creando la necesidad de incluir esta deficiencia en un programa de tamizaje neonatal, más cuando aproximadamente un 11 % de la población es afrodescendiente, que sin contar con el mestizaje, puede ofrecer una frecuencia mayor de la deficiencia en ciertas regiones del país.El presente estudio brinda entonces, una panorámica general de la prevalencia de esta enzimopatía eritrocitaria, en población con anemia hemolítica crónica o episódica de naturaleza no inmune, procedentes de diferentes lugares del territorio nacional. Comprende la valoración de 3837 muestras durante el periodo 1998 al 2016, un total de 1801 controles y 2036 individuos (982 hombres/1054 mujeres, Rango de edad: 1 semana a 91 años) con hallazgos sugerentes de esta condición metabólica.Los resultados encontrados, ofrecen una prevalencia del 7 % de la deficiencia con grados variables de actividad residual. El rango general de los grupos control osciló entre 3,31 - 9,98 UI/gr HB, contrastante contra el grupo de afectados (n=144) que ofreció un valor de 0,0 – 2,97, el 67 % (n=96) correspondiente a varones afectados. Estos hallazgos evidencian la importancia de incluir dentro de un programa de detección neonatal, esta enzimopatía eritrocitaria
Método microespectrofotométrico para la determinación de valores de referencia de la fosfomanosa isomerasa
(2020) Jhoan Andrés Samacá Martín; Adis Ayala Fajardo; Alfredo Uribe
Los desórdenes congénitos de glicosilación son un conjunto de defectos genéticos de tipo multisistémico que afectan la función de la proteína. Se han descrito cerca de 75 enfermedades desde sus primeros estudios. En el presente estudio se desarrolló un método microespectrofotométrico para el diagnóstico de la enzima citosólica fosfomanosa isomerasa EC 5.3.1.8 (PMI), se analizaron 32 muestras de individuos con rango de edad de 0,6 a 27 años y se estableció el intervalo y el valor de referencia de actividad enzimática específica. Este estudio permitirá iniciar el diagnóstico de pacientes eficientes de la PMI de forma temprana y oportuna, lo cual la convierte en una posible enzima candidata para pruebas de tamizaje neonatal, ya que esta patología tiene un tratamiento fácil y de bajo costo, que consiste en la suplementación de manosa en forma oral. El diagnóstico clínico de este desorden metabólico beneficiará al paciente y a su familia al mejorar su calidad de vida, como también al sistema de salud colombiano.
Selective Screening for Lysosomal Storage Diseases with Dried Blood Spots Collected on Filter Paper in 4,700 High-Risk Colombian Subjects
(Wiley, 2013) Alfredo Uribe; Roberto Giugliani
Valoración de Beta-Galactosilceramidasa leucocitaria como apoyo diagnostico en las enfermedades neurodegenerativas de sustancia blanca
(2010) Manuela Jay; Adis Ayala; Isidro Arévalo-Vargas; Alfredo Uribe
La literatura mundial ha reportado más de 100 enfermedades neurodegenerativas relacionadas con errores innatos del metabolismo que presentan un amplia expresión fenotípica, una de ellas es la enfermedad de Krabbe (EK), desorden genético autosómico recesivo neurodegenerativo que afecta la sustancia blanca debido a la deficiencia de la enzima β-galactosilceramidasa (β-Galsil), que cliva a la galactoceramida en ceramida y galactosa, generando un fenómeno progresivo de depósito intralisosomal que conlleva a retardo en el desarrollo, macrocefalia, convulsiones y pérdida de la audición. Objetivo: se presentan los primeros reportes en Colombia de valores de actividad enzimática leucocitaria para β-Galsil en controles normales y un estudio preliminar de individuos con enfermedad neurodegenerativa. Materiales y métodos: se midió la actividad leucocitaria de β-Galsil con Trinitrofenilamino-lauroilgalactocerebrosido (TNPAL-Galactocerebrosido) para el método colorimétrico (COL) y 6-hexadecanoilamino-4- metilumbeliferil-β-D-galatosido (HMU-βGal) para fluorométrico (FL). Se analizaron 66 muestras, 50 controles y 16 individuos con cuadros neurodegenerativos. Se uso como enzima control β-galactosidasa. La actividad se expresa en nmol/mg proteína/hora. Resultados: se obtuvo una actividad para β-Galsil en controles en un rango de 2 a 7 para COL y 0.1 a 2.5 para FL. En el estudio se detecto un paciente con marcada reducción en la actividad enzimática compatible con enfermedad de Krabbe con un valor de 1.85 para COL y de 0.034 para FL. Conclusiones: se ofrece un rango de referencia preliminar para la actividad de β-Galsil que puede ser aplicado a tamizajes de alto riesgo de enfermedades Neurodegenerativas. Las técnicas propuestas ofrecen una gran confiabilidad para la detección y diagnóstico precoz de KD.