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Caracterización genética de cepas silvestres de trypanosoma cruzi tci aisladas en zonas endémicas del continente americano mediante el método de tipificación de secuencias multilocus de junio del 2012 a junio del 2014
(Facultad de Ciencias Farmacéuticas y Bioquímicas, 2015) Cortez Velarde, Jacqueline Andrea
Trypanosoma cruzi, el agente de la enfermedad de Chagas, esta subdividido en seis grupos nombrados TcI-TcVI. En particular, el grupo TcI esta frecuentemente muestreado en toda la área de distribución de T. cruzi. En el presente trabajo, se analizaron por primera vez a través del método de tipificación por secuenciación en varios loci (MLST), utilizando un gen nuclear (Gpi) y cinco genes del maxicírculo del kinetoplasto (12-9S, Nd8-9, CoIII, Cyb y Nd1),un centenar de cepas de TcI, todas aisladas de biotopos silvestres en toda el área de distribución del parásito. El principal objetivo fue esclarecer la estructura genética en el grupo TcI de cepas selváticas a través de tres niveles: genéticos, geográficos y de huéspedes y después revelar posibles eventos de introgresión mitocondrial como se informó en anteriores trabajos. Las secuencias de TcI fueron analizadas consecuencias de referencia de los 6 grupos genéticos para construir árboles filogenéticos basados en el método de máximo de verosimilitud y redes filogenéticas basadas sobre el algoritmo median joining. Este estudio mostró que los genes mitocondriales son más polimórficos que el gen nuclear Gpi. Para los genes mitocondriales, en el árbol filogenético y en la red reticulada, se observaron 3 grupos genéticos formados por TcI, TcII y el grupo TcIII-IV-V-VI. Por otra parte, algunas cepas de EE.UU. identificadas como TcI con marcadores nucleares, se agruparon a nivel mitocondrial con el grupo TcIII-IV-V-VI, revelando un evento claro de introgresión mitocondrial. No se evidencia estructura genética en TcI silvestre para ninguno de los genes excepto para el gen mitocondrial Nd1 que revela una división significativa de TcI en un sub-grupo, resultado, que contradice lo reportado en otros estudios anteriores que describen 4 o 5 subdivisiones en TcI. Se observa la ausencia de asociación entre geografía y los haplotipos encontrados; efectivamente en varios países se observan numerosos haplotipos y un mismo haplotipo se puede encontrar en varios países. Igualmente no se encuentra asociación de haplotipos con huéspedes; un mismo haplotipo puede ser transportado por diferentes huéspedes y el mismo huésped puede encontrarse infectado por distintos haplotipos. Aunque estos análisis no permiten llegar a la conclusión definitiva acerca de las rutas de dispersión de TcI en el área endémico, la ausencia de estructura genética y la ausencia de asociación entre haplotipos y geografía o huéspedes, son compatibles con escenario de varias olas de dispersión de las cepas (activa o pasiva) y la ocurrencia de eventos de recombinación dentro de TcI selvático.
Evaluación del comportamiento de β2microglobulina y semaforina3A en lupus eritematoso sistémico como biomarcadores de actividad de la enfermedad y nefritis lupica mediante el análisis de la expresión génica por RT-qPCR en orina
(Facultad de Ciencias Farmacéuticas y Bioquímicas, 2023) Cortez Velarde, Jacqueline Andrea; Sosa Tordoya, Luis Fernando
Objetivo: Evaluar el comportamiento de β2Microglobulina (β2M) y Semaforina3A (Sema3A) en lupus eritematoso sistémico como biomarcadores de actividad de la enfermedad y nefritis lúpica mediante el análisis de la expresión génica por RT-qPCR en orina. Métodos: Se utilizó RT-qPCR para cuantificar la expresión relativa de ARNm por el método 2-ΔΔCt de β2M y Sema3A en la orina de 81 pacientes de sexo femenino, 44 con diagnóstico de LES y 37 voluntarios sanos como controles. Los pacientes fueron categorizados según la actividad de la enfermedad y la presencia o ausencia de nefritis lúpica. En todos los pacientes se evaluaron biomarcadores potenciales mediante ELISA. El análisis de comparación se realizó utilizando la prueba de la t de Student o la prueba de la U de Mann Whitney. La capacidad de los biomarcadores para discriminar entre dos grupos de pacientes fue hecho mediante el análisis de la Curva ROC y el AUC. Resultados: En pacientes con LES se observó una expresión urinaria elevada del gen β2M (2.4 veces mayor) y del gen Sema3A (9.1 veces mayor únicamente en el 25% de pacientes con expresión detectable) en comparación con voluntarios sanos. No se encontraron diferencias significativas en los niveles de expresión de β2M y Sema3A en el análisis comparativo de los grupos de LES activo e inactivo ni entre los grupos de LES con y sin afectación renal (valor p> 0,05 en todos los casos). Los valores del AUC para β2M y Sema3A fueron de 0.750 y 0,536 respectivamente en el contexto de actividad, y de 0.708 y 0.667 respectivamente, en relación con la afectación renal, indicando cierta capacidad para distinguir entre grupos, pero sin alta precisión (valor p> 0,05 en todos los casos). Conclusiones: Estos hallazgos sugieren, limitada utilidad de β2M y Sema3A como biomarcadores precisos para la actividad del LES o la presencia de NL en estos pacientes.