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Evaluacion de la actividad antiviral de Opuntia soehrensii utilizando como modelo la infeccion in vitro en cultivo de lineas celulares por virus respiratorio sincitial
(Facultad de Ciencias Farmacéuticas y Bioquímicas, 2013) Guarachi Condori, Marina
El Virus Respiratorio Sincitial Humano (VRS) es la principal causa de infecciones virales del tracto respiratorio en todo el mundo, las manifestaciones clínicas son desde infecciones asintomáticas hasta bronquiolitis y neumonía principalmente en niños menores de 2 años, adultos mayores de 60 años y personas con problemas cardiopulmonares; la importancia además de la elevada morbilidad son las secuelas que deja a largo plazo. Actualmente se investigan terapias alternativas para el tratamiento de infecciones por VRS debido a la carencia de antivirales efectivos disponibles. En el presente trabajo se estudió el extracto acuoso de la semilla de Opuntia soehrensii un miembro de la familia Cactaceae para evaluar su actividad antiviral determinando la Concentración Efectiva Media (CE50) frente al virus. Para esto se emplearon sistemas in vitro, infectando VRS en la línea celular BHK-21, la evaluación se llevo a cabo por el método de reducción de la sal de Tetrazolium (MTT) y el análisis observacional del efecto citopático (ECP), estos ensayos fueron realizados de manera posterior a la determinación de la Dosis Infectiva Media en Cultivo Celular (TCID50). Los resultados obtenidos muestran que O. soehrensii posee potente actividad antiviral cuando se adiciona tanto en cultivo de células a ser infectados como a células ya infectadas. El extracto alcanzo la CE50 a concentraciones de 21; 2,1 y 0,21 mg/mL dependiendo del tiempo de exposición y de la etapa de infección viral al cual es incorporado. El extracto de O. soehrensii se presenta como un producto promisorio en la resolución de infecciones por VRS. Los aspectos relacionados a su mecanismo de acción deben ser estudiados para proponer el uso de este extracto como fitoterapeutico.
Generación de masa celular y evaluación de la actividad metabólica en cultivos in vitro de Galipea longiflora.
(Facultad de Ciencias Farmacéuticas y Bioquímicas, 2009) Guarachi Condori, Marina
Dentro de la amplia biodiversidad de la Amazonía boliviana, se encuentra la especie vegetal Galipea longiflora k. predominantemente en los departamentos de La Paz y Beni, esta especie ha sido estudiada y caracterizada por su contenido de alcaloides quinolínicos los cuales presentan propiedades leishmanicidas in vitro e in vivo. A partir de explantes de hojas de plántulas, fueron obtenidos cultivos celulares en el medio Murashige y Skoog (MS) sólido con la adición de kinetina 0,1 mg/L, ácido 2,4 diclorofenoxiacético 5 mg/L, sacarosa 30 mg/L, agar 8 g/L; pH 5,8±1, en condiciones de oscuridad continua a 28±2 °C por 4 semanas. A través del arreglo trifactorial 23, fueron incrementados las concentraciones de C12H22O11 (de 30 a 40 g/L), NH4NO3 (de 1650 a 1655,6 mg/L), KH2PO4 (de 170 a 226,6 mg/L). Con el incremento conjunto de los tres componentes se logro obtener el mayor coeficiente de crecimiento (6.57) comparado con el medio testigo (3.96), el crecimiento fue evaluado por la variación en el peso húmedo. De acuerdo a la evaluación estadística de las variables, el incremento de KH2PO4 es el que ejerce mayor influencia sobre la formación de biomasa. Adicionalmente fue evaluado el comportamiento cinético de células de G. longiflora en medio líquido MS en el que el valor de coeficiente de crecimiento máximo alcanzó el valor de 1.52 muy por debajo del obtenido en los callos. En las condiciones de cultivo en medio sólido las actividades de las enzimas oxidasa y peroxidasa fueron determinadas con el cromógeno ABTS (2,2" azino-bis(3-etilbenzotiazolina-6-sulfonato)). La oxidasa presenta mayor actividad en la tercera semana de cultivo; mientras que, la actividad peroxidasa es mayor a la primera semana de cultivo, con la tendencia posterior a la disminución, la actividad enzimática fue independiente de la variación de nutrientes ensayada. Sin embargo, la actividad oxidasa y peroxidasa son dependiente de la etapa de crecimiento en la que se encuentran los callos. El material seco y molido de callos de G. longiflora, fue extraído con diclorometano, para luego ser separados en cromatografía en columna abierta utilizando como eluyente mezclas de: éter de petróleo, diclorometano y metanol. En cromatografía en capa fina se observaron bandas con Rf´s similares a: 2-fenilquinolina, 2-(3,4-metilendioxi)-feniletil-quinolina, 2-n-pentilquinolina, 4-metoxi-2-fenilquinolina, 2-(3,4 dimetoxi) feniletilquinolina. La banda con mayor intensidad, presente en todas las extracciones, fue analizada por Resonancia Magnética Nuclear y Espectrometría de Masas, confirmándose la producción de 2-fenilquinolina, durante el cultivo. Cabe mencionar que esta sustancia es el componente mayoritario de los alcaloides producidos en las hojas de G. longiflora en su hábitat. Las células cultivadas, in vitro, de G. longiflora mantienen la capacidad de sintetizar alcaloides quinolinicos, y de acuerdo a las características de crecimiento obtenidos, estos otorgan perspectivas para la obtención continua de alcaloides quinolinicos leishmanicidas haciendo uso de las herramientas de la biotecnología vegetal, para su posible aplicación en el tratamiento de las distintas Leishmaniasis.