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Aislamiento y cultivo de células madre posnatales de dientes primarios
(LA Referencia, 2014) Daniela Olávez; Siham Salmen; Karla Padrón; Carmine Lobo; Nancy Díaz; Lisbeth Berrueta; Eduvigis Solórzano
Antecedentes: Las enfermedades degenerativas representan en la actualidad un problema de salud pública, de allí que el desarrollo y aplicación de estrategias que permitan restituir parcial o totalmente tejidos afectados tiene un especial interés en el campo biomédico. Una de las estrategias terapéuticas se basa en el uso de células mesenquimáticas, en particular las provenientes de la pulpa dental. Objetivo: Desarrollar un cultivo de células mesenquimáticas a partir de pulpa dental de dientes deciduos. Métodos: Incluyó el aislamiento de células mesenquimáticas de la pulpa dental de 2 caninos temporarios extraídos con indicaciones terapéuticas, y cultivo en medio D-MEM con SBF al 20% a 37◦C en atmósfera húmeda, realizando cambios de medio de cultivo cada tres días y observación cada 7 días. La confluencia del 80-90% se logró luego de 3 semanas, se realizó la tinción con DAPI y STRO-1, y análisis mediante citometría de flujo y microscopia de fluorescencia. Resultados: Los análisis muestran células adherentes purificadas con morfología fusiforme similar a fibroblastos y aparición de conglomerados semejantes a unidades formadoras de colonias. El total de la población mostró un 17% de positividad al STRO-1, mientras que la población de mayor tamaño y más compleja mostró una positividad del 26%, asimismo STRO-1 se localizó preferencialmente en las unidades formadoras de colonias. Conclusión: Con el protocolo descrito se logró un cultivo de células mesenquimaticas extraídas de pulpa dental en dientes deciduos, como punto de partida para futuros ensayos terapéuticos y su aplicación en la regeneración tisular.
Análogo de tejido conectivo a partir de fibroblastos gingivales sembrados en membranas de colágeno comercial
(2013) Daniela Andreina Olávez Cepeda; Lisbeth Sosa; Karla Andreína Padrón Durán; Siham Salmen; Lisbeth Berrueta; B Lorena Dávila; Gladys Josefina Velazco Viloria; A Susana Arteaga; Leonel Castillo; N Eduvigis Solórzano
Modern dentistry using guided tissue regeneration and tissue engineering in periodontal defects and gingival recession treatment, applying surgical techniques such autologous grafts have shown excellent results. The objetive was to determine the efficiency of gingival connective tissue analogs, obtained from cultured fibroblasts seeded on a commercial collagen scaffold, for grafting in Wistar rats induced gingival recession. The methodology Connective tissue analog was developed sowing a human gingival fibroblasts culture on a collagen scaffold Membracel®-O, at the same time it was induced a 2 mm gingival recession in the central incisors of three Wistar rats, lifting a Newman flap to create a marginal bone dehiscence; 45 days after, the connective analog graft was inserted in rat 2, rat 3 received a Membracel ®-O graft without cells and rat 1 didn’t received any graft leaving it as a control, finally the animals were clinically evaluated every week before euthanasia. The results: Rat 1 maintained the 2mm gingival recession, rat 2 achieved an insertion gain of 2 mm also presenting increased biotype and rat 3 presented a 1.5 mm gingival recession. It can be suggested that using Membracel ®-O to produce connective tissue analogues may be an alternative to gingival recession treatment since insertion gain was achieved with no evidence of clinical signs of rejection.
Efectos de exposición ocupacional a plaguicidas sobre la integridad de la cromatina espermática
(2011) Roald Gómez‐Pérez; Gerardo Rojas; Leticia Miranda‐Contreras; Ibis Crúz; Lisbeth Berrueta; Siham Salmen; Carlos Contreras; Alirio Balza; Leisalba Zavala; Melisa Colmenares
Objetivo: Evaluar los efectos de la exposición a plaguicidas organofosforados y carbamatos sobre la integridad de cromatina espermática en trabajadores agrícolas.\nMétodos: Se evaluaron 64 trabajadores del campo, con edades entre 18 y 55 años, de la comunidad rural de Bailadores, Municipio Rivas Dávila, Estado Mérida, Venezuela, expuestos directamente a \n\nplaguicidas. Para el diagnóstico de exposición a plaguicidas, fueron determinados los niveles de las colinesterasas eritrocitaria (AChE) y plasmática (PChE). Para evaluar la fertilidad masculina, a cada \n\ntrabajador se le realizó seminograma y se les evaluó la integridad de la estructura de cromatina espermática mediante la técnica “Sperm Chromatin Structure Assay” (SCSA).\nResultados: El 25% de los trabajadores agrícolas presentó niveles deprimidos de AChE y el 83% con niveles anormales de PChE, con una reducción <75% del nivel normal. El grupo con edades entre 18 y 28 \n\naños fue el más afectado. Diferencias significativas fueron obtenidas en los promedios de los niveles de colinesterasas entre los casos normales y alterados, tanto para AChE (3,95±0,42 vs. 2,72±0,16, \n\nρ<0,0001) así como para PChE (2,08±0,25 vs. 1,43±0,32, ρ<0,0001). El 69,7% de los trabajadores con niveles anormales de PChE presentó alteración en el ADN espermático. Se encontró una correlación \n\nnegativa significativa entre el Índice de Fragmentación de ADN (IDF) espermático y los niveles de PChE (ρ=0,02).\nConclusiones: En trabajadores agrícolas expuestos directamente a plaguicidas organofosforados y carbamatos, un alto porcentaje presentó niveles anormalmente deprimidos de PChE, junto con \n\nalteración en el ADN espermático. Estos resultados demuestran que los trabajadores se encuentran con alto riesgo de exposición a los efectos tóxicos de plaguicidas, lo cual efectivamente se comprueba \n\ncon los resultados de análisis de las enzimas colinesterasas y la aplicación de la técnica SCSA para determinar la integridad de la cromatina espermática.
Expresión y purificación del antígeno preS1/2 y su utilidad en el estudio de la patogenia de la infección por el virus de la hepatitis B
(Universidad Autónoma del Estado de México, 2013) Masyelly Rojas; Juan Camilo Valencia-Molina; Daniela Montes-Berrueta; Gery Rosmary Ruiz-Carrillo; Leidith Berrueta-Carrillo; Darrell L. Peterson; Lisbeth Berrueta; Siham Salmen
"El preS1/2 es parte de las proteínas de envoltura del virus de la hepatitis B (VHB), con funciones importantes en la inmunopatogenia de la enfermedad. Para su estudio es necesario contar con la proteína pura y así dilucidar su participación en el daño generado en el tejido hepático. Para ello se procedió a la expresión del preS1/2 previamente clonado en el vector peT3d, en la cepa de E coli HMS174 (DE3), seguido por su purificación mediante columnas de afinidad hacia residuos de histidina (6xhistidina) y finalmente sometidas a liberación de contaminantes mediante el uso de columnas de afinidad hacia endotoxina y filtración por centrifugación, de esta manera utilizarla para evaluar su efecto sobre hepatocitos humanos. El procedimiento utilizado permitió obtener 1,5 mg de proteína pura funcionalmente estable por cada litro de medio de cultivo. En este trabajo se describe un método sencillo de expresión y purificación del preS1/2 recombinante y se evidencia la obtención de un producto intacto, con potencial uso en estudios funcionales y futuros ensayos terapéuticos."
Expresión y purificación del preS1/2 del virus de la hepatitis B (VHB) y su utilidad en el diagnóstico de la infección
(Universidad Internacional de La Rioja, 2013) Yismelvy Marquez; María Luisa Monsalve; Siham Salmen; Lisbeth Berrueta
La hepatitis B es una enfermedad inflamatoria del tejido hepático causada por la infección crónica del virus de la hepatitis B (VHB). Su diagnostico se basa en la detección de anticuerpos y antígenos contra dos de sus principales proteínas inmunogenicas, el antígeno de superficie (HBsAg) y el del core (HBcAg). Existen otros dos componentes de la envoltura altamente inmunogenicos el preS1/2, sin embargo su papel en la evaluación de la respuesta serológica aún no ha sido evaluado. Es por ello que en este trabajo se propone expresar y purificar el preS1/2 usando a la Escherichia coli como sistema de expresión por ser el menos costoso a fin de obtener una proteína con propiedades antigénicas adecuadas para su utilización en el diagnostico serológico y evaluación de la respuesta inmune. El preS1/2 previamente clonado en el vector pET3d-preS1/2 se utilizó para transformar a la cepa de Escherichia coli (HMS174) y después de inducir la síntesis proteica mediante el uso de IPTG, se purifico mediante columna de afinidad al níquel, posteriormente analizadas en gel de electroforesis poliacrilamida, para seleccionar las fracciones de preS1/2. Después de dializarlas y liofilizarlas se logró obtener 5,4 mg/ml de la proteína pura, confirmado mediante la realización del western blott con un anticuerpo monoclonal específico. Estos resultados indican que este método es fácil, poco costoso y rápido para obtener una proteína pura con potencial uso en el diagnostico serológico de la infección por VHB.
Homenaje al Dr. Fernando Merino Niño
(2013) Lisbeth Berrueta; Siham Salmen
encuentra tu pasión y hazla posible, dale un propósito a tu vida por encima de todo; que la motivación por alcanzar tus metas sea siempre mayor que el temor al fracaso” Anónimo FERNANDO MERINO NINO (1946-2011) DEDICO SU VIDA A SU PASION MÁS GRANDE: LA INVESTIGACION. Nació en España y a los 7 años de edad se mudó con su familia a Caracas, Venezuela, en donde creció y se obtuvo su título de Médico Cirujano a los 22 años de edad, en las aulas de la ilustre Universidad Central de Venezuela (UCV). Posteriormente, continuo su formación académica en Búfalo en el estado de Nueva York, USA, donde obtuvo el grado de Doctor en Ciencias y luego regresa a Venezuela e inicia su carrera como investigador en el Centro de Medicina Experimental del Instituto Venezolano de Investigaciones Científicas (IVIC) y paralelamente como profesor de la UCV adscrito al Instituto Anatomopatológico de la Universidad Central de Venezuela. Fernando
Inmunodeficiencias primarias: inmunopatogenia, infecciones asociadas y estrategias terapéuticas
(Universidad Internacional de La Rioja, 2013) Siham Salmen; Rima Bahsas Zaky; Nubia Silva; Luisa Barboza; Guillermo Terán Ángel; Lisbeth Berrueta; Raian Contreras Cardone; Astrid Cantor Garcia; Fabiola Silva; Yanett Guzman Escalona
Primary immunodeficiencies disorders (PID) are a group of genetic defects that affect both innate and adaptive immune response. PID are associated with: 1) absence of cellular components, 2) impaired connection among components of the immune response, as well as in the recognition of foreign, self or modified antigens, and 3) inappropriate modulation of effectors mechanisms either by inability to reach affected tissues, to promote proinflammatory and regulatory polarization, or perform the clearance of invading agents. PID not only increases the susceptibility to infections by different microorganisms, but also alters the homeostatic mechanisms and immune surveillance, that prevent autoinflammatory and neoplastic diseases. This review describes some of these defects, its consequences and the initial approach to the study and management of recurrent infections.
Instituto de Inmunología Clínica
(2013) Lisbeth Berrueta
El Instituto de Inmunología Clínica (IDIC) es una dependencia de la Facultad de Medicina de la Universidad de los Andes, que ha venido desarrollando sus actividades de manera ininterrumpida desde sus inicios hace mas de 30 años, como Unidad de Inmunología Clínica, adscrita al departamento de medicina del Hospital Universitario de los Andes, hasta su creación y aprobación por el Consejo Nacional de Universidades en 1993, constituyéndose en un verdadero centro de referencia tanto regional como nacional, con sus múltiples contribuciones en los campos de la Investigación, docencia y extensión.
Isolation and Culture of Postnatal Stem Cells from Deciduous Teeth
(2014) Daniela Olávez; Siham Salmen; Karla Padrón; Carmine Lobo; Nancy Díaz; Lisbeth Berrueta; Eduvigis Solorzanio
Background: Currently, degenerative diseases represent a public health problem; therefore, the development and implementation of strategies to fully or partially recover of damaged tissues has a special interest in the biomedical field. Therapeutic strategies based on mesenchymal stem cells transplantation from dental pulp have been proposed as an alternative. Purpose: To develop a mesenchymal stem cells culture isolated from dental pulp of deciduous teeth. Methods: The mesenchymal stem cells isolation was performed from dental pulp of two deciduous canines, freshly extracted with therapeutic indication. Specimens were cultured in D-MEM medium with 20% FBS at 37 °C and 5% CO2. The medium was changed every three days. 80-90% confluence was achieved after three weeks. Cells were stained with DAPI and STRO-1 and analyzed through flow cytometry and fluorescence microscopy. Results: The analysis showed that adherent cells had a fusiform fibroblast-like morphology and colony forming units (CFUs) were observed. 17% of the whole population was STRO-1+ and 26% of the larger and more complex population was positive to this antigen. Additionally, STRO-1+ cells were localized preferential in UFCs. Conclusions: The protocol described here could be used to enriching mesenchymal stem cells from dental pulp extracted from deciduous teeth and as a starting point for future therapeutic trials and their application in tissue regeneration.KEYWORDScultured cells; stem cells; deciduous teeth
MECHANISMS OF NEUTROPHIL DEATH IN HIV INFECTED PATIENTS: ROLE OF ROS, CASPASES AND MAP KINASES PATHWAYS (46.14)
(American Association of Immunologists, 2007) Siham Salmen; Henry Montes; Andrés Sóyano; Dimas Hernández; Lisbeth Berrueta
Abstract Neutrophils from HIV+ patients have an increased susceptibility to undergo programmed cell death (PCD), which could explain neutropenia during advanced disease. In this work, key steps of PCD have been evaluated in neutrophils from HIV+ patients. The role of caspase-3, caspase-8, MAPK and ROS, were analyzed. Spontaneous neutrophil death is caspase-3 but no caspase-8 dependent, suggesting that the intrinsic pathway is involved as a pathogenic mechanism of PCD. Inhibition of ROS decreased spontaneous PCD and caspase-3 hydrolysis, connecting oxidative stress and Caspase-3 within neutrophils PCD in HIV infected patients. An increased constitutive phosphorylation of p38 MAPK, associated to increased neutrophils death in HIV+ patients, following inhibition of this kinase, was observed, suggesting a role for p38 MAPK in cell survival during the disease. We conclude that oxidative stress secondary to HIV infection can accelerate neutrophil death.
Muerte celular inducida por condiciones ambientales adversas en Calibrachoa parviflora (Petunia)
(Universidad Internacional de La Rioja, 2012) Daniela Montes Berrueta; Sofía Dugarte Da Silva; Nathaly Rojas Duque; Siham Salmen; Lisbeth Berrueta
It has been previously reported that extreme environmental conditions such as high temperatures, ultraviolet light and the\ngreenhouse effect, alter the rate of growth in plants. In this study we investigated the acute effect of two extreme\nenvironmental conditions: nutrient deprivation and soil acidification with sulfuric acid, a compound commonly deposited in\nthe soil, as a result of acid rain, on the rate of death and cell proliferation in petunias (Calibrachoa parviflora). For this\npurpose, a group of petunias was subjected to three different conditions: group A or control, kept in optimum conditions\nand nutrient supply, group B in the absence of nutrients and natural light and group C, exposed to water acidified with\nsulfuric acid. In continuous observations for up to 72 hours, samples from petals, leaves and stems of each plant were\nanalyzed and after nuclei extraction; these were treated with propidium iodide, a DNA intercalator compound, and\nanalyzed by flow cytometry and fluorescence microscopy. The results show that both extreme conditions generate an\nimbalance in the process of death/survival of petunias, but unlike plants from group B, plants in group C, did not increase\ntheir rate of cell proliferation. These results suggest that plants growing in acid soils lose their ability to compensate the\nstress signal generated as a result of acute exposure to toxic concentrations of sulfuric acid.
NEF-HIV-1 incrementa la expresión del factor de transcripción FOXP3 en monocitos humanos
(Universidad Internacional de La Rioja, 2013) Juan Camilo Valencia; Guillermo Terán Ángel; Luisa Barboza; Darrell L. Peterson; Lisbeth Berrueta; Siham Salmen
Introducción: Un mecanismo utilizado por el VIH para evadir la respuesta inmune es favoreciendo una respuesta reguladora al incrementar las Células T Reguladoras (TREG) durante la infección, estas células expresan Foxp3, un factor de transcripción asociado con actividad supresora, cuya presencia ha sido confirmada en monocitos y macrófagos. Siendo los monocitos/macrófagos susceptibles a la infección VIH-1, y uno de los principales reservorios virales, se evaluó el papel de Nef (una de las principales proteínas reguladoras del VIH), en la expresión de Foxp3 en monocitos humanos. Nef-VIH-1 fue expresada en E. coli y la proteína purificada se expuso a monocitos de sangre periférica de individuos seronegativos. La expresión de Foxp3 fue analizada mediante citometría de flujo y western-blot.
Purificación de fibroblastos gingivales a partir de tejido de la mucosa bucal
(Universidad Internacional de La Rioja, 2012) Karla Padrón; Siham Salmen; Lisbeth Berrueta; E. González González; Lorena Dávila; Joselyn Rojas; Lisbeth Sosa; Daniela Olávez; Eduvigis Solórzano
Fibroblasts are widely used in regenerative medicine, as key elements in the restoration of the gingival tissue and facial\ntreatments. The aim of this study was to standardize in our laboratory a method to obtain highly pure fibroblasts from\ngingival tissue. In order to do that, cells were mechanically disaggregated from gingival tissue and separated by ficoll\nhypaque density gradients. This procedure was performed several times yielding an enriched culture of adherent cells,\nwhere 51% resulted positive for the fibroblast marker ER-TR7. Our results indicate that the method used, allow to obtain\nfibroblasts from gingival tissue; cells with great potential in the field of regenerative medicine and it represents, in our\ncommunity, the first step to implement therapeutic strategies that will allow the restoration of damaged tissues,\nparticularly in the oral mucosa.
[Role of human immunodeficiency virus in leukocytes apoptosis from infected patients].
(National Institutes of Health, 2005) Siham Salmen; Carolina Guillermo; Melisa Colmenares; Luisa Barboza; Loredana Goncalves; Guillermo Terán; Nacarid Alfonso; Henry Montes; Lisbeth Berrueta
The hallmark of the immunodeficiency virus infection is a progressive detriment of the immune response which has been associated to a gradual loss of its responsible components, in particularly, CD4 positive T cells. Although this cell population is considered the main target of the virus, there is a recent deal of interest in studying other components that may not be targets of the virus, but are important elements to control infectious microorganisms and that have been demonstrated to be altered during HIV infection. Neutrophils (PMN) are innate immune components that play a fundamental role against HIV infection and these cells have been described as functionally altered during AIDS. It has been suggested that such a dysfunction could be attributed to an increased susceptibility of these cells to accelerated spontaneous apoptosis. However, the underlying mechanisms that induce programmed cell death of neutrophils remain unknown. In previous works we have explored some events involved during cell death of neutrophils from HIV infected patients. It is the purpose of this work to review the current knowledge of apoptosis signals in neutrophils and to discuss our own data about some mechanisms involved in spontaneous and Fas mediated apoptosis, which may contribute to understand neutrophils dysfunction during HIV infection.
Situación actual de la investigación en Venezuela: ¿Hacia dónde vamos?
(2012) Siham Salmen; Lisbeth Berrueta
La investigación biomédica tiene dos vertientes\nprincipales: la investigación básica y la clínica o aplicada.\nCada una de ellas juntas o por separado, juega un papel vi\ntal\nen la búsqueda de soluciones a problemas que aquejan a los\nseres vivos, aplicable a todas nuestras comunidades. Un\nejemplo tangible, son los grandes avances en el manejo y\ncontrol de la infección por el virus de la inmunodeficiencia\nhumana (VIH), que g\nracias al trabajo en conjunto de\ninvestigadores en diferentes áreas (biología, inmunología,\nvirología, epidemiología, biotecnología) se conoce la\nestructura viral, su ciclo biológico, los mecanismos de\nevasión de la respuesta inmune, mecanismos naturales d\ne la\nrespuesta protectora; conocimientos que en un todo han\nsido aplicados para el desarrollo de herramientas\ndiagnosticas, estrategias de seguimiento, identificación de\nmarcadores pronósticos, así como también el desarrollo de\nestrategias terapéuticas. As\ní, la ciencia no debe ser vista\ncomo una disciplina aislada donde se le resta importancia a\nun área por encima de otra, debido a que los resultados no\nson siempre inmediatos, sino con visión futura y que a\nmenudo escapa a nuestro alcance. La visión simplis\nta de\nresaltar solo la investigación con aplicabilidad inmediata,\nafectaría el progreso del conocimiento y de la búsqueda de\nla verdad en las diversas áreas del saber científico. Una de las\nprincipales herramientas utilizadas para transmitir los\nresultados\nobtenidos en investigación bien para su utilización\ndirecta o para su validación, por otros investigadores o por\nusuarios directos de estos resultados, son las publicaciones\nen revistas científicas, de reputación conocida y demostrable\nmediante arbitraje por expertos en el área en particular