Browsing by Autor "Oporto Velasco, Lise Amparo"

Now showing 1 - 2 of 2

Identificacion de anticuerpos contra islote de pancreas (ICA's) en pacientes diabeticos tipo 1 y en sus familiares mediante inmunofluorescencia indirecta, comparando entre un sustrato cacero y otro comercial (kit comercial), en el periodo 2003-2004 en el Instituto SELADIS
(Facultad de Ciencias Farmacéuticas y Bioquímicas, 2014) Oporto Velasco, Lise Amparo
El presente trabajo se realizó con el fin de optar a la prevención antes que el tratamiento de Diabetes Mellitus (DM) y constituye un estudio previo para contribuir y complementar investigaciones anterioresrealizadas en el Instituto SELADIS. Nos propusimos identificar Anticuerpos ContraIslote de Páncreas (ICA’s) en pacientes diabéticos tipo 1 y en sus familiares mediante Inmunofluorescencia Indirecta (IFI), comparando entre un sustrato preparado en el laboratorio y otro preparado comercialmente (Kit comercial). Para esto, realizamos la detección de anticuerpos antinucleares (ANA) para evitar que estos actúen como interferentes, estandarizando la técnica de adsorción de sueros que presentaron ANA+ mediante la previa obtención de núcleos purificados en solución. Además preparamos cortes a congelación en tejido glandular de páncreas de rata para utilizarlo como sustrato “cacero” para la detección de ICA’s mediante IFI y determinar la glicemia basal y la detección de ICA’s mediante IFI utilizando ambos sustratos y correlacionar los resultados con la evaluación física de los pacientes. Finalmente se logró identificar ICA’s en pacientes con Diabetes Mellitus y en sus familiares de 1er. y 2do. grado, mediante IFI, comparando entre un sustrato preparado en el laboratorio y otro preparado comercialmente, técnica útil como “Prueba de Tamizaje”. Se determinó el título de ANA’s en todas las muestras, ya que todas mostraron un título mínimo de 1/40. Mediante nuestra técnica estandarizada de obtención de núcleos purificados en suspensión, se obtienen 10 mL de núcleos en suspensión en una concentración de 3 x 10 6 núcleos/mL, por cada 10 a 15 g de tejido empleado. Se estandarizó la técnica de adsorción de sueros que presenten anticuerpos antinucleares positivos (ANA+) mediante los núcleos purificados en solución. Se obtuvieron buenos cortes a congelación en tejido glandular de páncreas de rata para utilizarlo como sustrato “cacero” para la detección de ICA’s mediante IFI. La glicemia basal en los pacientes con Diabetes Mellitus tipo 1 y en sus familiares. La evaluación física para la identificación de factores de riesgo, estuvieron en relación con la presencia de ICA’s tanto en pacientes como en sus familiares genéticamente predispuestos. Los valores de glucosa basal tiene un valor determinante en el presente trabajo, ya que sirve como indicador del metabolismo de los hidratos de Carbono. Ladetección de ANA’s fue imprescindible e importante debido a que éstos mostraron ser interferentes para la técnica de IFI en la detección de ICA’s, por lo tanto es necesaria una adsorción previa, siendo una muy buena alternativa la técnica estandarizada y desarrollada en el presente trabajo. En cuanto las ventajas y desventajas de la utilización del páncreas de rata y de mono como sustrato, una desventaja innegable de la utilización de páncreas de rata, recae sobre el tiempo que toma la técnica completa, siendo que para la técnica del kit comercial se nos facilitó toda ésta etapa previa. Se consideran sujetos ICA+ a familiares de 1er. grado de diabéticos cuando en dos ocasiones consecutivas dos sueros distintos de la misma persona los ICA´s persisten, por lo tanto, los resultados de IFI en páncreas de mono del presente trabajo no son, definitivos. La importancia clínica en detectar uno o más auto anticuerpos característicos de la DM1, permite identficar con mayor probabilidad a personas con riesgo para DM1, dando opción al paciente de adoptar medidas preventivas.
Optimización del MTT como método de cuantificación de la proliferación celular de esplenocitos murinos.
(Facultad de Ciencias Farmacéuticas y Bioquímicas, 2016) Oporto Velasco, Lise Amparo
La inmunidad de tipo celular constituye un mecanismo fundamental para la defensa del organismo. Esta respuesta, mediada por linfocitos T, es esencial para la protección contra patógenos intracelulares, como por ejemplo infecciones por parásitos intracelulares como es el caso de la leishmaniasis, toxoplasmosis, etc. Es por eso que se han desarrollado pruebas inmunológicas que permiten evaluar su funcionalidad, siendo la proliferación de linfocitos in vitro inducida por mitógenos, una prueba ampliamente utilizada. En la actualidad en nuestro medio, el Instituto de Investigaciones Fármaco-Bioquímicas (IIFB), de la Facultad de Ciencias Farmacéuticas y Bioquímicas de la Universidad Mayor de San Andrés (UMSA), forma parte de un equipo multidisciplinario internacional que está llevando adelante estudios sobre la eficacia de formulaciones farmacéuticas a base de los principios activos de Evanta, frente a la leishmaniasis cutánea y continua en sus trabajos de investigación junto con el Instituto SELADIS (Facultad de Ciencias Farmacéuticas y Bioquímicas-UMSA) sobre nuevas alternativas para el tratamiento de la leishmaniasis a partir de extractos vegetales. En el presente trabajo se optimizó el método del MTT para evaluación del efecto del Extracto de Alcaloides de Evanta (EAE) sobre la proliferación inducida por Lipopolisacárido (LPS) y Concanavalina A (Con A) en sistemas de cultivo celular primario (esplenocitos murinos) y a la vez se evaluó el efecto sobre la producción de interferón gamma detectable en los sobrenadantes de los cultivos inducidos con Concanavalina A. Se obtuvieron curvas de proliferación celular similares al inducir la proliferación con Con A y LPS, logrando determinar una concentración celular óptima para las pruebas siguientes, basándonos en la proliferación observada con controles de crecimiento sin mitógenos y con Tamoxifén como control de inhibición de proliferación. Al someter las células a distintas concentraciones del Extracto de Alcaloides de Evanta (EAE) se observó un efecto dosis-dependiente con una reducción de la proliferación celular de 35 % para una concentración de 10 µg/mL de evanta. Las células respondieron menos a la estimulación de Con A, comparados con el control no tratado y con el control de inhibición de la proliferación (tamoxifén). Los porcentajes de inhibición del crecimiento celular obtenidos fueron de 16%, 35% y 78% a concentraciones de 1, 10 y 25 µg/mL respectivamente. La inhibición de la producción de IFN-γ en los cultivos de esplenocitos murinos inducidos con Con A, es notable a partir de 1 µg/mL, estando más marcada a partir de 10 µg/mL. Se logró optimizar la técnica del MTT como método de cuantificación de proliferación celular en esplenocitos murinos, lo que nos permitió identificar la concentración celular óptima recomendable para los siguientes experimentos. Observamos un efecto inhibitorio de la proliferación (Porcentaje de inhibición = 35% para 10 µg/mL) proporcional a la concentración del EAE, por lo que podemos decir que afecta la funcionalidad celular a partir de 10 ug/mL. Por lo tanto los resultados muestran un efecto específico inhibitorio del EAE sobre células T, afectando principalmente su funcionalidad; hecho evidenciado con el porcentaje de inhibición alto en cultivos inducidos por Con A y sobre la producción de Interferón gamma (INF-ɣ).