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Aplicación del método bioquímico-colorimétrico para identificar agentes trypanocidas
(Rev.Cs.Farm. y Bioq, 2019) Palma Tovar, Camila Isabel; Salamanca Capusiri, Efraín; Ticona Huallpara, Juan Carlos; Udaeta Velásquez, Enrique; Mita Díaz, Veronica; Vela Ramirez, Catherine Elena; Alacama Condori, Wara; Serrato, Alcides; Tito Avirari, Demetrio; Ybaguari Cartagena, Lucio; Ybaguari Quenevo, María; Amaturi Queveno, Dolores; Navi Queteguary, Victoria; Giménez Turba, Alberto
La tripanosomiasis americana es una enfermedad infecciosa desatendida, causada por el parásito protozoo Trypanosoma cruzi, que no cuenta con tratamiento en la fase crónica de esta enfermedad mortal, uno de los desafíos es encontrar terapias efectivas para esta compleja enfermedad, dado que no presenta síntomas asociables a la parasitosis por lo que es desconocida entre los médicos tradicionales. Nuestra Facultad está evaluando la medicina tradicional tacana como fuente de agentes antiparasitarios potenciales. El objetivo de este trabajo fue identificar productos naturales trypanocidas utilizando el método colorimétrico XTT-PMS. Para ello, se realizaron curvas de crecimiento de epimastigotes de T. cruziy determinamos el tiempo óptimo de realización de los ensayos. Se seleccionó la población inicial de trabajo (3x10(6)parásitos/mL), las condiciones de incubación (medio LIT, 27°C, 72 horas) y revelado (XTT-PMS, 4 horas). Con el protocolo optimizado, se realizaron evaluaciones de actividad de drogas control, controles naturales y 20 extractos crudos de plantas medicinales de la amazonía. La actividad se basó en cálculos de concentración inhibitoria media y se consideraron activos las sustancias con CI50< 50 μg/mL. De los 20 extractos evaluados, el 40% fueron activos. Las plantas más interesantes fueron Sipu sipu (CI50= 8.9 ± 1.7 μg/mL), Ejije bid'u (CI50= 9.1 ± 1.5 μg/mL) e Id'ene eid-hue (CI50= 10.8 ± 1.1 μg/mL) con valores de CI50 cercanos a los controles, confirmando la utilidad y potencial del protocolo desarrollado.
Estudios biodirigidos leishmanicidas y tripanocidas de plantas amazónicas: cultura Tacana
(Facultad de Ciencias Farmacéuticas y Bioquímicas, 2019) Palma Tovar, Camila Isabel
La enfermedad de Chagas y las leishmaniasis son enfermedades tropicales desatendidas endémicas en Bolivia. Uno de los desafíos es encontrar nuevas terapias efectivas y menos tóxicas, por lo que en nuestra Facultad se ha estado evaluando la medicina tradicional tacana como fuente de agentes antiparasitarios potenciales. Objetivo: Contribuir a la validación de la medicina tradicional amazónica mediante la generación de conocimiento científico por estudios químicos biodirigidos de especies vegetales utilizadas por la cultura tacana útiles en el desarrollo de nuevos tratamientos leishmanicidas y tripanocidas. Metodología: Se evaluaron ocho especies medicinales, las cuales fueron divididas en tres grupos en función a los adelantos en fraccionamiento e identificación de componentes. La actividad tripanocida y leishmanicida fue evaluada con un método colorimétrico, en tanto que la citotoxicidad se evaluó en células HeLa y PBMCs (Células Mononucleares de Sangre Periférica) usando un método fluorométrico. Resultados y Conclusiones: El fraccionamiento biodirigido permitió distinguir al Cheperequi (Jacaranda glabra) como interesante. En la evaluación biológica de fracciones con identidad química, la Cawuara (Tessaria integrifolia) dio lugar a sesquiterpenos de tipo eudesmano[57] y [60], mezcla de terpenos[56] y mezcla sesquiterpeno+amina[62] con actividad antiparasitaria. La Tapacha ina (Hypts mutabilis) permitió el aislamiento de olguina[32], la cual presentó actividad antiparasitaria. Dentro de los derivados hemisintéticos de la Yuruma huana dheja (Dendropanax arboreus) el derivado de la isorhamnetina[80] fue un leishmanicida potencial.
Método fluorométrico para identificar agentes naturales citotóxicos y su aplicación en la evaluación de agentes antiparasitarios selectivos
(Rev.Cs.Farm. y Bioq, 2019) Palma Tovar, Camila Isabel; Salamanca Capusiri, Efraín; Ticona Huallpara, Juan Carlos; Udaeta Velásquez, Enrique; Mita Díaz, Veronica; Vela Ramirez, Catherine Elena; Alacama Condori, Wara6; Ibaguari, Lucio; Ibaguari, María; Navi, Victoria; Tito Avirari, Demetrio; Serrato, Alsides; Marupa, Natalio; Chao, Benigno; Giménez Turba, Alberto
El ministerio de salud tiene como una de las prioridades en investigación a las enfermedades infecciosas, entre las que incluye a las leishmaniasis y la tripanosomiasis americana. En la Facultad Ciencias Farmacéuticas y Bioquímicas se estudian especies vegetales medicinales utilizadas por la cultura Tacana como fuente de agentes antiparasitarios potenciales. Los laboratorios dedicados al descubrimiento de moléculas naturales con actividad antiparasitaria, tienen el desafío de desarrollar protocolos que permitan detectar biomoléculas selectivas, efectivas y menos tóxicas que las disponibles. Por ende, las evaluaciones antiparasitarias in vitro (CI50), deberían ir acompañadas de evaluaciones de citotoxicidad (DL50), con el fin de calcular un Índice de Selectividad (IS=DL50 / Cl50 como parámetro de especificidad biológica. La citotoxicidad fue medida sobre líneas de macrófagos (RAW 264.7, murino), células involucradas en las infecciones por parásitos intracelulares. El protocolo fluorométrico parte con una población de 5x10(4) células/ mL, incubada a 37°C en DMEM (Dulbecco's Modified Eagle's médium), por 96 horas, con adición de resazurina (2mM) 3 horas antes de las lecturas finales. Bajo estas condiciones se evaluó la citotoxicidad de drogas control y 15 extractos vegetales seleccionados por su actividad anti-kinetoplastida. El extracto de Cosmailu fue el más citotóxi-co, Ejije bid'u resultó selectivo para T. cruzi y Leishmania amazonensis, mientras que Id'ene eidhue, fue selectivo para L. amazonensis. Finalmente, los otros 12 extractos resultaron ser poco selectivos o citotóxicos.