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Aplicación del método bioquímico-colorimétrico para identificar agentes trypanocidas
(Rev.Cs.Farm. y Bioq, 2019) Palma Tovar, Camila Isabel; Salamanca Capusiri, Efraín; Ticona Huallpara, Juan Carlos; Udaeta Velásquez, Enrique; Mita Díaz, Veronica; Vela Ramirez, Catherine Elena; Alacama Condori, Wara; Serrato, Alcides; Tito Avirari, Demetrio; Ybaguari Cartagena, Lucio; Ybaguari Quenevo, María; Amaturi Queveno, Dolores; Navi Queteguary, Victoria; Giménez Turba, Alberto
La tripanosomiasis americana es una enfermedad infecciosa desatendida, causada por el parásito protozoo Trypanosoma cruzi, que no cuenta con tratamiento en la fase crónica de esta enfermedad mortal, uno de los desafíos es encontrar terapias efectivas para esta compleja enfermedad, dado que no presenta síntomas asociables a la parasitosis por lo que es desconocida entre los médicos tradicionales. Nuestra Facultad está evaluando la medicina tradicional tacana como fuente de agentes antiparasitarios potenciales. El objetivo de este trabajo fue identificar productos naturales trypanocidas utilizando el método colorimétrico XTT-PMS. Para ello, se realizaron curvas de crecimiento de epimastigotes de T. cruziy determinamos el tiempo óptimo de realización de los ensayos. Se seleccionó la población inicial de trabajo (3x10(6)parásitos/mL), las condiciones de incubación (medio LIT, 27°C, 72 horas) y revelado (XTT-PMS, 4 horas). Con el protocolo optimizado, se realizaron evaluaciones de actividad de drogas control, controles naturales y 20 extractos crudos de plantas medicinales de la amazonía. La actividad se basó en cálculos de concentración inhibitoria media y se consideraron activos las sustancias con CI50< 50 μg/mL. De los 20 extractos evaluados, el 40% fueron activos. Las plantas más interesantes fueron Sipu sipu (CI50= 8.9 ± 1.7 μg/mL), Ejije bid'u (CI50= 9.1 ± 1.5 μg/mL) e Id'ene eid-hue (CI50= 10.8 ± 1.1 μg/mL) con valores de CI50 cercanos a los controles, confirmando la utilidad y potencial del protocolo desarrollado.
Estudio comparativo de métodos de extracción de alcaloides Quinolínicos de la Angostura longiflora K, Kallunki (Evanta) con actividad leishmanicida
(Facultad de Ciencias Farmacéuticas y Bioquímicas, 2009) Ticona Huallpara, Juan Carlos
El presente trabajo de investigación se desarrolló en el Instituto de Investigaciones Fármaco Bioquímicas (I.I.F.B.) dependiente de la Facultad de Ciencias Farmacéuticas y Bioquímicas de la Universidad Mayor de San Andrés, la finalidad de este trabajo fue realizar un estudio comparativo de métodos de extracción de los alcaloides quinolínicos con actividad leishmanicida presentes en la corteza y hojas de la planta medicinal Angostura longiflora (Krause) Kallunki (Evanta) empleando los métodos de: maceración con HCl, extracción mediante soxhlet, maceración con CH2Cl2 por percolación con y sin humectación previa con hidróxido de sodio. El método más eficiente fue el de extracción por percolación con CH2Cl2 con un rendimiento de 4.6 por ciento (corteza) y 3.9 por ciento (hojas). De estos extractos crudos se separaron, mediante lavados con HC1 N, H2SO41N y H3P041N, los alcaloides totales, obteniéndose el mejor rendimiento con HCl (2.0 por ciento para la corteza y 0.57 por ciento para las hojas). La actividad leishmanicida in-Vitro de los extractos crudos y alcaloides totales fueron determinados frente a promastigotes de diferentes cepas de Leishmania: L. amazonensis (IFLA/BR/75/PH8), L. brasiliensis (MHOM/BR/75/M2903) y L. donovani (MHOM/74/PP75) dando una CI50 entre 21.5 y 26.4μg/mL con los alcaloides totales de la corteza, y una CI50 entre 86.4 y 91.1μg/mL con el extracto crudo de corteza. También se obtuvo una CI50 entre 20.8 y 21.8μg/mL con los alcaloides totales de las hojas y una CI50 entre 52.7 y 55.6μg/mL con el extracto crudo de las hojas.
Estudio químico de dos plantas bolivianas de la Etnia Tacana: Galipea longiflora y Bowdichia virgilioides
(Facultad de Ciencias Farmacéuticas y Bioquímicas, 2015) Ticona Huallpara, Juan Carlos
Estudios químicos se han realizado sobre dos especies medicinales de la etnia Tacana: Corteza de árboles adultos de Galipea longiflora colectada en diferentes zonas [Santa Rosa de Maravilla (SR), Hernández (HE), Y-Abanico (YA), Covendo (CO), Luz Porvenir (PO)] y corteza de plantines de diferentes tamaños (14, 19, 30 y 51 cm) colectada en la comunidad de Santa Rosa de Maravilla. Hojas de Bowdichia virgilioides colectadas cerca de la comunidad de Macahua en el Departamento de La Paz, Bolivia. La corteza seca de Galipea longiflora (colectada en diferentes zonas y de plantines) fue pulverizada y sometida a extracción con CH2Cl2 y en los extractos crudos se han cuantificado los alcaloides totales (CAT). Seguidamente, todos los CAT fueron fraccionados por cromatografía en columna y las fracciones fueron procesadas por cromatografía en capa fina, analítica y preparativa, además de otras técnicas de cromatografía de absorción. Los alcaloides aislados fueron caracterizados por espectrometría (EM alta resolución) y espectroscopía (RMN 1H, 13C, DEPT) con experimentos homo-nucleares (COSY, ROESY) y hetero-nucleares (HSQC, HMBC). De todas las muestras se han caracterizado siete alcaloides quinolínicos: 2-fenil-quinolina; 2-n-pentil-quinolina; 2-fenil-4-metoxi-quinolina; 2-(3',4'-metilendioxifeniletil)-quinolina; 2-(3',4'-dimetoxifeniletil)-quinolina; Shiquimianina y Evolitrina, mientras que 2-n-pentil-quinolina (de PO y YA) y Evolitrina (de YA y CO) estaban ausentes en los CAT. De las cortezas de los diferentes plantines: 2-fenil-quinolina y 2-fenil-4-metoxi-quinolina, (14, 19 y 51 cm) junto con 2-n-pentil-quinolina (30 cm), y Shiquimianina (19 y 30 cm) fueron aislados. Extracciones a nivel de planta piloto, con corteza de plantas adultas, han sido estandarizadas y formulaciones farmacéuticas orales al 1, 2 y 5% de CAT se han elaborado. Las hojas secas de Bowdichia virgilioides, se sometieron a maceración con CH2Cl2 y el extracto crudo fue purificado por técnicas de cromatografía de exclusión utilizando Sephadex LH-20 y otras técnicas de cromatografía de absorción para rendir cinco triterpenos: Lupeol y Lupenona (esqueleto del Lupano), -Sitosterol y Estigmasterol (esqueleto de los Esteroles), y -Amirina (esqueleto del Oleano) los cuales fueron caracterizados por datos espectroscópicos y espectrométricos.
Método fluorométrico para identificar agentes naturales citotóxicos y su aplicación en la evaluación de agentes antiparasitarios selectivos
(Rev.Cs.Farm. y Bioq, 2019) Palma Tovar, Camila Isabel; Salamanca Capusiri, Efraín; Ticona Huallpara, Juan Carlos; Udaeta Velásquez, Enrique; Mita Díaz, Veronica; Vela Ramirez, Catherine Elena; Alacama Condori, Wara6; Ibaguari, Lucio; Ibaguari, María; Navi, Victoria; Tito Avirari, Demetrio; Serrato, Alsides; Marupa, Natalio; Chao, Benigno; Giménez Turba, Alberto
El ministerio de salud tiene como una de las prioridades en investigación a las enfermedades infecciosas, entre las que incluye a las leishmaniasis y la tripanosomiasis americana. En la Facultad Ciencias Farmacéuticas y Bioquímicas se estudian especies vegetales medicinales utilizadas por la cultura Tacana como fuente de agentes antiparasitarios potenciales. Los laboratorios dedicados al descubrimiento de moléculas naturales con actividad antiparasitaria, tienen el desafío de desarrollar protocolos que permitan detectar biomoléculas selectivas, efectivas y menos tóxicas que las disponibles. Por ende, las evaluaciones antiparasitarias in vitro (CI50), deberían ir acompañadas de evaluaciones de citotoxicidad (DL50), con el fin de calcular un Índice de Selectividad (IS=DL50 / Cl50 como parámetro de especificidad biológica. La citotoxicidad fue medida sobre líneas de macrófagos (RAW 264.7, murino), células involucradas en las infecciones por parásitos intracelulares. El protocolo fluorométrico parte con una población de 5x10(4) células/ mL, incubada a 37°C en DMEM (Dulbecco's Modified Eagle's médium), por 96 horas, con adición de resazurina (2mM) 3 horas antes de las lecturas finales. Bajo estas condiciones se evaluó la citotoxicidad de drogas control y 15 extractos vegetales seleccionados por su actividad anti-kinetoplastida. El extracto de Cosmailu fue el más citotóxi-co, Ejije bid'u resultó selectivo para T. cruzi y Leishmania amazonensis, mientras que Id'ene eidhue, fue selectivo para L. amazonensis. Finalmente, los otros 12 extractos resultaron ser poco selectivos o citotóxicos.