Evaluación de la actividad ciclohexanona monooxigenasa en cepas fúngicas y posterior optimización de las condiciones de cultivo para la producción de esta enzima.

Abstract

Ciclohexanona monooxigenasa (CHMO) cataliza la oxigenación nucleofílica de las moléculas lineales ocetonas cíclicas, obteniendo así sus correspondientes lactonas, estas lactonas a nivel industrial son obtenidas por síntesis química ocasionando daños al medio ambiente.La finalidad del presente trabajo es identificar microorganismos con activi dad ciclohexanona monooxigenasa y optimizar las condiciones de cultivo. Se evaluó la actividad CHMO de 90 cepas fúngicas las cuales fueron divididas en dos grupos: 85 cepas de mohos que fueron obtenidas del cepario del Instituto de Investigaciones Fármaco Bioquímicas (IIFB) y 5 cepas de levaduras las cuales fueron aisladas de tierras contaminadas con petróleo, obteniendo de allí 3 cepas con actividad enzimática, de las cuales, por consumo de sustrato se seleccion ó la cepa 177QD. Se procedió a identificar la cepa por sus características macroscópicas y microscópicas relacionandose con Aspergillus flavus. Posteriormente se procedió a optimizar las condiciones de cultivo de la cepa 177QD.En los factores químicos de cultivo se determinó que la concentración de glucosa ideal es de 30 g/L, obteniendo una actividad de 91 UI/L al cuarto día de cultivo, además se observó que con molibdato de amonio se obtiene una actividad de 109 UI/L al primer día de cultivo. Sobre l os factores físicos se observóque la temperatura ideal para el consumo de ciclohexanona como sustrato es de 22ºC y 37ºC con propágulos o biomasa indiferentemente; se determinó que el suministro de oxígeno es importante para la actividad enzimática, obt eniéndose 152 UI/L al primer día de cultivo al someterlo a un sistema de aireación con la presencia de glucosa a una concentración de 30 g/L. Además se observó que la agitación con magnetos disminuye la actividad enzimática. Por medio de la inducción química se obtuvo 103UI/L al segundo día de cultivo al añadir cafeína a una concentración 20uL/mLy,149UI/L al segundo día de cultivo con el filtro de luz de color amarillo.