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Construcción de un Vector de Virus de Planta Portando una Secuencia Mutagenizada del GEN NEF Del HIV-1
(2017) Arnaldo Noguera
Los vectores de virus de plantas representan una alternativa excelente como sistema\nde expresión de proteínas heterólogas, especialmente de biofármacos y vacunas\nmulticomponentes. Diferentes antígenos del HIV-1 han sido expresados exitosamente en\nplantas a través de sistemas de transformación estable o expresión transitoria. Dentro del\ngrupo de proteínas que componen el virión del HIV, Nef es considerada un blanco promisorio\npara la formulación de vacunas debido al papel que desempeña durante los primeros pasos de\nla infección viral. En el presente trabajo se reportan los resultados de la construcción de una\nquimera viral portando una secuencia modificada del gen nef del HIV-1. Se introdujeron dos\nsustituciones puntuales en los sitios reconocidos por las enzimas de restricción XhoI y KpnI\nutilizando la técnica de amplificación por PCR. Con este propósito se emplearon dos cebadores\nmutagénicos y dos silvestres en tres rondas de amplificación por PCR para cada sustitución.\nLos amplicones portadores de la doble mutación fueron ligados al vector de expresión viral\npTMV30B-GFPC3, y se multiplicaron por transformación en células de E. coli XL1-blue; los cuales\nfueron posteriormente purificados y analizados por digestión y secuenciación. Los productos\nde la transcripción in vitro de esta quimera se inocularon en plantas de Nicotiana benthamiana,\ny la infectividad de los transcriptos se validó por sintomatología y RT-PCR. Los resultados\ndemostraron que la quimera viral construida produjo transcriptos infectivos capaces de inducir\nsíntomas característicos en las plantas inoculadas; lo cual abre la posibilidad para desarrollar\nuna vacuna anti-HIV producida en plantas.
La botánica y sus ramas auxiliares.
(2016) Arnaldo Noguera
Plataformas de expresión en plantas de péptidos humanos terapéuticos: expresión transitoria y estable
(Universidad Internacional de La Rioja, 2013) Arnaldo Noguera; Gustavo Alberto Fermin Muñoz
In plant expression platforms of therapeutic human peptides: transient and stable expression. Plants represent an alternative expression system for the production of complex heterologous proteins such as vaccines, antigens, antibodies, erithropoietin and human insulin. These living systems offer many advantages over other traditional expression systems based on the cultivation of cells of bacterial, yeast, insect or mammal origin: low production costs, a reduced time to reach big scale production, as well as proper expression, modification and folding of the recombinant protein, along with a complete lack of contamination risks with human pathogens. In the last decade, genetic engineering of plants has made a wide use of the stable expression systems based on the phytopathogenic bacteria Agrobacterium tumefaciens, besides the transient expression based on plant virus vectors aimed at producing beneficial compounds for the health and well being of humans. Use of these viral elements in the production systems of recombinant proteins has simplified both the manipulation and infection processes of plants with the chimeric gene. Furthermore, the analysis of immunogenicity displayed by plant glicans when present in heterologous peptides has allowed understanding which molecular pathways are more convenient to express, fold, compartmentalize and increase the accumulation of the protein of interest. With this short review we intend to provide the readers detailed information about the strategies of heterologous expression that make use of plant systems, the main therapeutic agents developed based on these systems and the biological importance of the post-translational modifications of the recombinant peptides.