Estandarización y validacion de pruebas de elisa tipo indirecto para la determinación de los niveles de anticuerpos IgG e IgE anti-leishmania, como método complementario para el diagnóstico y seguimiento de la respuesta al tratamiento

Abstract

La leishmaniasis cutánea se caracteriza por la inducción de una respuesta inmune celular y humoral, siendo los niveles de anticuerpos IgG e IgE indicadores serológicos del diagnóstico, la progresión y resolución de la enfermedad. En el presente estudio se estandarizaron dos pruebas de ELISA indirecto para determinar los niveles séricos de anticuerpos IgG o IgE contra antígeno soluble de Leishmania braziliensis (ASL). Se trabajo a partir de la cepa de L. braziliensis (MHOM/ BR/75/M2903). En el ELISA IgE se hizo un pre-tratamiento del suero con anticuerpos anti-IgG humano y Polietilenglicol (PEG); la dilución óptima de la muestra para ambos ELISA fue 1/21, la dilución del conjugado fue 1/500 para el ELISA IgG y 1/100 para el IgE. Para el ELISA IgG estandarizado se encontró un índice de correlación de Kappa de 1 (p<0,05), frente al ELISA comercial r-Biopharm®. Con una sensibilidad del 100%; 100% de especificidad, 100% valor predic-tivo positivo y 100% valor predictivo negativo. Sin embargo ambos test de ELISA presentaron reacciones cruzadas con anticuerpos anti-Trypanosoma. La validez de los resultados demuestran que los ELISAs estandarizados pueden ser utilizados como herramienta de diagnóstico y seguimiento al tratamiento leishmanicida.

Cutaneous leishmaniasis is character-ized by the induction of a cellular and humoral immune responses, at levels of IgG and IgE indicators serological diagnosis, progression and resolution of disease. In this study two indirect ELISA tests were stan-dardized to determine serum levels of IgG or IgE antibodies against soluble Leishmania braziliensis antigen (ASL). We worked from the strain of L. braziliensis (MHOM / BR / 75 / M2903). In the IgE ELISA pretreatment serum was done with anti-human IgG and Polyethylene glycol (PEG) antibodies; The optimal dilution of the sample for both ELISA was 1/21, the conjugate dilution was for 1/500 and 1/100 IgG ELISA for IgE. For standardized ELISA IgG index Kappa correlation of 1 (p <0.05) compared to commercial ELISA r-Biopharm® found.With a sensitivity of 100%; 100% specificity, 100% positive predictive value and negative pre-dictive value 100%. However both ELISA test showed cross-reactions anti-trypanosome antibodies. The results demonstrate that both ELISA can be used as diagnostic and monitoring tool. Being necessary to continue studies to validate these procedures and identify other possible cross-reactions.