UMSAgen, método para la extracción simultánea de RNA y DNA para diagnóstico molecular

Abstract

INTRODUCCIÓN El RNA y el DNA son materiales genéticos de la célula cuya extracción es útil para la medicina moderna. Actualmente existen varios métodos de extracción de RNA y DNA por separado y a costos altos. En este trabajo se describe el método UMSAgen como alternativa para la extracción simultanea de RNA total y DNA genómico para diagnósticos moleculares. MATERIAL Y MÉTODOS Se obtuvieron veinte muestras de médula ósea de pacientes con leucemia mieloide crónica. Los leucocitos fueron separados de los glóbulos rojos con tampón de lisis. Aproximadamente 3 x 106 de células fueron lisadas en guanidio y conservadas a -20 ºC hasta el momento de la extracción del RNA y DNA. Se realizaron extracciones con 3 diferentes métodos: a) El método comercial Quiagen para el RNA total, b) el método clásico fenol-cloroformo para el DNA genómico y c) el método UMSAgen para extracción simultanea de RNA y DNA. RESULTADOS La pureza del RNA total y DNA genómico extraídos por el método UMSAgen es similar a la extraída con el Kit Quiagen para el RNA y la técnica clásica para el DNA. La evaluación realizada por electroforesis en agarosa y la amplificación del daño molecular BCR-ABL y JAK-2 V617F, por RT-PCR y PCR respectivamente, fue exitosa. CONCLUSIÓN El método UMSAgen es una alternativa fácil y económica para la extracción de RNA total y DNA genómico en diagnóstico e investigación molecular.

INTRODUCTION The RNA and the DNA are genetic materials of the cell. The RNA/DNA extraction is necessary in modern medicine. Several RNA/DNA isolation methods exist but they are very expensive and therefore not applicable in our country. In this work, we describe the UMSAgen method as an alternative for simultaneous total RNA and genomic DNA extraction for molecular diagnosis. MATERIAL AND METHODS Twenty bone marrow samples of chronic myeloid leukemia patients were obtained. The leukocytes were separated from the erythrocytes with lyses solution; 3x106 cells were lysed in guanidio solution and conserved at -20ºC until the extraction procedure. The extraction of nucleotide acids was realized by 3 different methods: a) commercial method QuiagenTM for RNA extraction, b) classic method (phenol/chloroform) for DNA extraction and c) UMSAgen method for simultaneous RNA/DNA extraction. The two first methods were used as a control test for UMSAgen. RESULTS The quality and quantity of total RNA and genomic DNA obtained by the UMSAgen method were similar to that of the QuiagenTM Kit and the classic method, respectively. The ABL-BCR and JAK-2V617F amplification by RT-PCR and PCR were successful. CONCLUSIONS The UMSAgen is an easy and inexpensive altrernative method for total RNA and genomic DNA extraction in diagnostic and biomolecular research.